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ABI7500荧光定量pcr仪 光学校准

时间:2020-02-09 14:24 点击次数:
 
ABI7500荧光定量pcr仪 光学校准
5.4.3 光学校准
5.4.3.1 全程戴上一次性无粉手套操作。
 
5.4.3.2 从贮存在冷冻柜内的光谱校准套件中取出 ROI 校准反应板。
5.4.3.3 让 ROI 校准反应板温度上升至室温(至少需要 5 分钟)。
 
5.4.3.4 从包装袋中取出 ROI 校准反应板,振荡反应板 5 秒钟。(重要!不要丢弃存放反应板的包装袋。若将 ROI 校准反应板贮存在其原始包装套内, ROI 校准反应板最多可重复使用三次。 )
(如果执行 ROI 校准后,将 ROI  校准反应板保持在室温,则跳到步骤 5.4.3.5 ,以减少在反应
 
板在室温时形成的冷凝。如果 ROI 校准反应板位于冷冻柜中,转至步骤 5.4.3.2 。
 
5.4.3.5 用板式离心机将反应板离心 2 分钟。 ROI 校准反应板必须充分混合并离心。确认 ROI 校准反应板每个反应孔中的液体均位于反应孔底部。如果不是,则以更长的时间离心反应板。
5.4.3.6 按压托盘门,  将其打开。 将反应板装入仪器中的反应板架。 确保放置时反应板在反应孔板适配器中被正确对齐。以一定角度向托盘右侧施加压力,从而关闭托盘门。

 
5.4.3.7 在 7500 Software 中,选择 Instrument  → Instrument Maintenance Manager  。在 Instrument Maintenance Manager 中,选择  Optical  选项卡。 在 Optical 选项卡中, 单击  Start Calibration 。
5.4.3.8 按照向导的指示,完成校准。 Optical Calibration 对话框显示四个选项卡:
 
 Overview –显示校准相关信息。
 
  Setup –显示光学校准设置说明。单击 Next 提示可以打开 Run 选项卡。
  Run –单击  START RUN 可以开始校准流程并显示处理消息。 单击 Next 提示可以打开 Analysis
 
选项卡。
 
  Analysis –指明校准状态 (Passed/Failed) 。
 
如果校准失败,请参阅 5.4.2.12 “排除背景校准故障” 。
注:开始校准之前,仪器可能暂停一段时间(最多可达 10 分钟),以允许受热的护盖达到正确温度。
5.4.3.9 取出校准反应板:
 
①按压托盘门,将其打开。
 
②取出校准反应板。
 
③按压托盘门,使其滑入仪器。
 
5.4.3.10 将校准反应板放入其包装套中。将放入包装套的反应板放回贮存在冷冻柜内的光谱校准套件中。
(重要! 不要丢弃校准反应板。 如果将反应板装在其原始包装套内贮存, 在打开其包装后最多可重复使用反应板 3 次 。)
5.4.4 染料校准
 
5.4.4.1 全程戴上一次性无粉手套操作。
5.4.4.2 从冷冻柜中取出光谱校准套件,并从套件内取出所有染料反应板。
 
5.4.4.3 将光谱校准套件放回冷冻柜贮藏。
 
5.4.4.4 让染料反应板温度上升至室内温度(约需 5 分钟)。
(重要!在立即运行之前,请勿从包装袋内取出染料反应板。在每个染料反应板上,反应孔中的荧光染料具有光敏感特性。长时间暴露在光线中会降低反应板的荧光信号强度。 )
注:如果将 7500 Real-Time PCR Instrument 染料反应板贮存在其原始包装内并放在冷冻柜中,
 
则在打开包装后 6 个月内可以校准 7500 Real-Time PCR Instrument 最多 3 次。
 
5.4.4.5 在 7500 Software 中,选择 Instrument  → Instrument Maintenance Manager  。在 Instrument Maintenance Manager 中,选择 Dye 选项卡。在 Dye 屏幕上,选择 System Dye Calibration 。

单 击 Start Calibration 。
 
5.4.4.6 按照向导的指示,完成每个反应板的校准。 (重要!在每个校准中,向导将单独指示。必须独立设置、运行和分析每个染料反应板。 ) Dye Calibration 对话框显示四个选项卡:
? Overview –显示校准相关信息。当软件提示获取需要的材料时,选择要校准的染料。
 
Setup –显示染料校准设置说明。 单击  Next 提示可以打开 Run 选项卡。 当软件提示装入染料反应板时,按照步骤 5.4.4.10 所述准备并装载反应板。
 Run – 单击 START RUN 可以开始校准流程并显示处理消息。单击 Next 提示可以打开
 
Analysis 选项卡。
 Analysis –指明校准状态 (Passed/Failed) 。当软件提示分析从每个染料反应板采集的光谱时, 核实校准的状态:
Passed - 7500 Instrument 校准通过。转到步骤 5.4.4.11 的②。
Failed -7500 Instrument 校准失败。请参阅 5.4.4.15 “排除染料校准故障” 。
 
注:开始校准之前,仪器可能暂停一段时间(最多可达 10 分钟),以允许受热的护盖达到正确温度。
5.4.4.7 将软件所需的染料反应板从其包装中取出。振荡反应板 5 秒钟。(重要!不要丢弃存放反应板的包装袋。若贮存于原包袋中,反应板最多可重复使用 3 次 。
5.4.4.8 用板式离心机将反应板离心 2 分钟。反应板必须充分混合并离心。确认反应板每个背景反应孔中的液体均位于反应孔底部。如果不是,则以更长的时间离心反应板。
5.4.4.9 检查并确保要装入的染料反应板与在 7500 Software 中选取的荧光匹配。
 
5.4.4.10 按压托盘门,将其打开。将反应板装入仪器中的反应板架。确保放置时反应板在反应孔板适配
器中被正确对齐。关闭托盘门。以一定角度向托盘右侧施加压力。 (注:如果无法打开托盘,  样本块可能位于其 “升高”位置,锁定了托盘位置。 要降低样本块, 选择 Instrument → Calibrate , 然后退出 ROI Inspector 。)
5.4.4.11 因为向导对每个染料校准单独提供指示,所以请对校准的每个染料执行以下程序。


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