ABI7500荧光定量pcr仪详细使用方法
1.目的：
确保荧光定量 PCR 仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2.范围：
适用于 AB7500 荧光定量 PCR 仪的使用及维护。
3.定义：
无
4.职责：
荧光定量 PCR 仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。
5.内容：
5.1 室内温度控制在 15 ～30 ℃，相对湿度 45 ～ 75% 。
5.2仪器操作
5.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入 Windows 界面。
5.2.2接着打开 AB7500 仪器电源开关，预热 10 分钟。
5.2.3点 击 7500 Software v2.3 图标，打开软件。
5.2.4按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的 8 联 PCR 反应管或者 96 孔 PCR 反应板放入检测孔位，记下放置位置。检测 8 联 PCR 反应管用 ** 反应孔模块，检测 96 孔 PCR 反应板用 ** 反应孔模块。（检测 8 联 PCR 反应管需放入盖紧管盖的空 8 联 PCR 反应管配平，检测 96 孔 PCR 反应板无需配平）
5.2.5再次按压托盘使其滑入仪器。
5.2.6 新建扩增参数模板：例如新建一个 UG-63-62 的模板，扩增参数是 95°， 10′；（ 95°， 10″； 63°，
45″）×5 cycles ；（ 95°，10″；62°，35″）×40 cycles ，在 62°时收集荧光信号 （ HEX 、FAM 信号），
20μl反应体系。
5.2.6.1在 Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples 中，将 Target Name 下 的 Target1 改 成 FAM ； 点 击 Add New Target ，将新增的 Target1 改成 HEX ，点击 Reportee 下拉菜单，选择 VIC 。
5.2.6.2在 Setup-Run Method-Graphical View 中的 Reaction Volume Per Well 后面输入 20 （ 20μl反应体系）。选中第一个 Holding Stage ，点击 Delete Selected 删除；在 Cycling Stage 中的 Number of Cycles 后输入 5 ，在 Step1 中输入时间 10 秒，在 Step2 中输入温度 63 度，输入时间 45 秒， 将 63 度下面收集荧光图标点掉；点击 Add Stage 下拉菜单选择 Cycling ，在 Cycling Stage 中的 Number of Cycles 后输入 40 ，在 Step1 中输入时间 10 秒，在 Step2 中输入温度 62 度，输入时间 35 秒，在 62 度下面点击图标收集荧光。
5.2.6.3点 击 Save 下 拉 菜 单 下 的 Save As Tamplate ， 文 件 名 输 入 UG-63-62 ， 保 存 在 默 认
ab7500-config-tamplates 文件夹内，关闭设置界面。
5.2.7已有扩增参数模板：在软件 Home 界面中点击 Template ，选择需要的模板，点击打开。例如：
UG-63-62 ，其扩增参数就是 95°，10′；（ 95°，10″；63°，45″）×5 cycles ；（ 95°，10″；62°，35″）
×40 cycles ，在 62°时收集荧光信号（ HEX 、FAM 信号）， Reaction Volume Per Well :20 μ（l20μl反应体系）。
5.2.8在 Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples 中选择 8 联管摆放的位置， 全部勾选 Sample 1 ；
UGT1A1*6 勾 选 HEX ， UGT1A1*28 勾 选 FAM 。
5.2.9在 Run-Amplification Plot 中点击 START RUN ，命名为 20140101-1 （当日日期 +当日上机次数， 例:2014 年 1 月 1 日第 1 次上机编号为 20140101-1 ），保存在默认文件夹中，开始运行。
5.2.10结果分析
5.2.10.1PCR 反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。
5.2.10.2也可根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以（用户可根据实际情况自行调整， Start 值可以在 3 ～15 、End 值可设在 5～ 20 ）， Threshold 值（ Rn ）推荐设定为 5000 ～ 15000 ，点击 Analyze 进行分析，然后到 Plate 窗口下记录每个反应的 Ct 值。
5.2.11实验结束后取出反应管 （切勿打开管盖） ，顺序关闭 AB7500 软件、定量 PCR 仪电源， 关闭电脑。
5.3仪器维护
5.3.1每周维护
5.3.1.1检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。
? 至少每周检查一次计算机磁盘空间。
? 如果硬盘的可用空间不足其总容量的 20% ，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。
5.3.1.2关闭控制 7500 Instrument 的计算机， 30 秒后再次开启计算机。
5.3.1.3用无绒布块（不脱毛）蘸取 75% 酒精清洁 7500 Instrument 的表面。（注：切勿使用有机溶剂清洁 7500 Instrument 。）
5.3.1.4使用 75% 酒精浸泡反应管托架（晾干后放回仪器内） 。
5.3.2每月维护
5.3.2.1执行背景校准。 （可执行一次背景校准以检查是否存在污染物）
5.3.2.2运行磁盘清理和磁盘碎片整理。
? 至少每月一次。
? 当 Windows ?操作系统显示消息提示执行碎片整理时。
? 切勿同时运行磁盘管理实用工具和 7500 Real-Time PCR Software 。
5.3.3每半年（ 6 个月）维护
ABI7500荧光定量pcr仪详细使用方法 由上海巴玖实业有限公司公司整理，如果有其他问题，可以提出，后面再做回答
